Pharmaceutical Technology Ed. 173

52 EdiciónSudamérica 2021 - N º173 Pharmaceutical Techno logy o GFP citoplásmica (CyG), con células mononucleares de sangre periférica (PBMC) (E:T, 5:1) recién aisladas y se trataron con Herceptin. La proliferación de múltiples esferoides y la citotoxici- dad mediada por células inmunes se cuantificaron cinéticamente utilizando la intensidad de fluorescencia dentro del límite del campo claro, que no requiere el enmascaramiento del tumor de múl- tiples esferoides fluorescentes. Las PBMC solas (datos no mostrados) o Herceptin solo tuvieron poco o ningún efecto sobre el tamaño o la viabilidad de múltiples esferoides (intensidad de fluorescencia, Figura 7). Sin embargo, Herceptin activó las PBMC, lo que resultó en una pérdida marcada de la viabilidad de la EM. Herceptin indujo un efecto citotóxico dependiente de la concentración en multiesferoides positivos para HER2, pero no en multiesferoides negativos para HER2. Los multiesferoides BT-474 parecieron más sensibles a la citotoxici- dad de Herceptin, con la concentración de prueba más alta de Herceptin (1 μg/ml) que produjo aproximadamente el 80% de inhibición en comparación con aproximadamente el 50% en los multiesferoides SKOV3 (Figura 8, curva de concentración-respuesta). La activación de la población de células T de PBMC con un anticuerpo AntiCD3 y un cóctel de IL-2 (10 ng / ml de cada uno) dio como resultado una muerte máxima en todos los tipos de células (Figura 8, ciclos de tiempo). Conclusiones En esta nota de aplicación de- mostramos que el sistema de análisis de células vivas Incucyte® junto con el sistema Incucyte®, el módulo de software Spheroid, permite el análisis de cocultivos multiesferroides 3D con células del estroma o inmunes a lo largo del tiempo y es aplicable a las pruebas de compuestos. Hemos mostrado: • El análisis de células vivas demostró que SK-BR-3 formó múltiples esferoides más compactos cuando se cultivó con NHDF. • Las imágenes de células vivas revela- ron efectos temporales de los NHDF en la morfología de múltiples esferoides MDA-MB-231. • Se aclararon los perfiles de crecimien- to temporal específicos del tipo celular para un panel de multiesferoides de tumores de mama. • La capacidad de realizar perfiles com- puestos en tiempo real en un formato de 96 pozos. • La capacidad de visualizar cinética- mente y cuantificar la citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos (ADCC) inducida por células inmunes dentro de multiesferoides de tumores diana en tiempo real. • Las PBMC activadas por Herceptin causaron una pérdida dependiente de la concentración de la viabilidad de múl- tiples esferoides positivos para HER2. Los modelos 3D más avanzados, que incorporan una matriz extracelular y ti- pos de células adicionales (por ejemplo, células del estroma o células inmunes) tienen el potencial de proporcionar mo- delos de traducción más relevantes para el estudio del microambiente tumoral en la biología tumoral. Varias características del sistema de análisis de células vivas Incucyte® son particularmente ventajosas para monitorear y cuantificar objetivamente la biología 3D de múltiples esferoides en tiempo real. Las imágenes DF Brightfield permiten el estudio sin etiquetas de la morfología y la proliferación de esferoides 3D en formatos de ensayo de 96 pocillos para un rendimiento mejorado. Sin necesidad de seleccionar un criterio de valoración predefinido, la Interrogación de imágenes para obtener una mayor comprensión. Se sembraron células MCF7 o SK-BR-3 cocultivadas con NHDF en placas de 96 pocillos de fondo plano prerrevestidas (Matrigel) (relación 1:1, 1000 células / pocillo de cada una) y se dejó que se formaran múltiples esferoides (3 d) antes del tratamiento con Lapatinib y Camptotecina (CMP). Las imágenes de Incucyte® Brightfield (5 días) muestran los efectos de los tratamientos sobre el tamaño y la integridad de múltiples esferoides. Nota: efectos citotóxicos de CMP en multiesferoides MCF7 y SK BR-3 y su diferencia en la sensibilidad a Lapatinib. FIGURA 5