Pharmaceutical Technology Ed. 173

54 EdiciónSudamérica 2021 - N º173 Pharmaceutical Techno logy Impacto de las PBMC inducidas por Herceptin sobre la proliferación de múltiples esferoides. Se sembraron células tumorales que expresaban de manera estable RFP nuclear restringida (SKOV3-NR, MCF7-NR) o GFP restringida citoplásmicamente (BT 474-CyG) en placas de 96 pocillos de fondo plano (1000 células / pocillo en un lecho de Matrigel). Se dejó que se formaran múltiples esferoides (3 d) antes de la adición de PBMC recién aisladas (E: T, 5: 1) y Herceptin. Las imágenes de campo claro y fluorescencia de Incucyte® S3 (7 d; SKOV3-NR, MCFNR o 10 d; BT-474- CyG) comparan el efecto de Herceptin sobre la proliferación de esferoides en ausencia (panel superior) y presencia (panel inferior) de PBMC (La máscara de contorno de campo claro se muestra en amarillo). Nótese la pérdida de intensidad de fluorescencia en multiesferoides positivos para HER2 (SKOV3 y BT474) en presencia de PBMC. FIGURA 7 Cuantificación cinética de la muerte de células inmunes por ADCC de multi-esferoides positivos para HER- 2. Las células tumorales se sembraron en placas de 96 pocillos de fondo plano (1000 células / pocillo en un lecho de Matrigel) y se dejaron formar multiesferoides (MS) durante 3 d. Una vez formados, los MS se cultivaron conjuntamente con PBMC recién aisladas (E: T, 5: 1) y se trataron con diluciones en serie de Herceptin. Los cursos de tiempo muestran la muerte de múltiples esferoides cuantificada como una pérdida de intensidad de fluorescencia dentro del objeto de campo claro esferoide. Las curvas de respuesta a la concentración de Herceptin muestran diferencias de sensibilidad entre múltiples esferoides positivos para HER2 (SKOV3 y BT-474). Los tratamientos dirigidos a poblaciones de células T (Anti-CD3 e IL-2, 10 ng / ml) indujeron una citotoxicidad máxima de la EM en todos los tipos de células. Los datos se recopilaron durante 10 días a intervalos de 6 horas. Cada punto de datos representa la media ± SEM, n = 4 pozos. FIGURA 8