Pharmaceutical Technology Ed. 191

Pharmaceutical Techno logy 25 Edición Sudamérica 2024 - N º191 verse afectado por la variabilidad en la composición de la carga, la sensibilidad a la composición del tampón y las estrategias de fraccionamiento”, explicó. Khanal y su equipo descubrieron que la eliminación de cápsides vacías y parciales con un alto rendimiento rara vez se ha demostrado en la literatura científica. A través de su estudio, el equipo presentó estrategias de separación de tres etapas para dos constructos de AAV recombinante (rAAV) en las que demostraron una forma de superar el equilibrio entre el rendimiento y la pureza. La primera estrategia utilizó la química de la resina (Poros XQ, Poros HS, Poros I) combinada con una mez- cla de agentes cosmotrópicos (es decir, aditivos), como sulfato de amonio o sulfato de sodio, que promovieron la estabilidad de la cápside a baja fuerza iónica. Luego se utilizaron iones metálicos (por ejemplo, cobre, mag- nesio, calcio) para promover la selectividad de la cápside deseada. “El uso de iones de cobre mejoró la resolución entre la separación de la cápside vacía y llena, y ayudó a eliminar otras impurezas relacionadas con el producto”, afirmó Khanal en su presentación. En la segunda estrategia, se utilizó una estructura y geometría de resina/medio adecuadas para excluir el AAV de los poros de resina más pequeños. Este enfoque mi- nimizó la dispersión de partículas y mejoró la resolución. “La cromatografíamonolítica y demembranamostró una mejor resolución de pico que la resina tradicional basada en un comportamiento de transporte favorable”, afirmó también Khanal. La tercera estrategia del equipo implicó la transición de la cromatografía de columna única a la de columnas múl- tiples en serie. Esta cromatografía en serie de columnas múltiples se realizó cargando 1,5 veces la capacidad de saturación de la resina, lo que permitió una reducción de más del 40 % de las cápsides parciales y una eliminación de más del 95 % de las cápsides vacías. “Usando estas estrategias, proporcionamos la mejor modalidad para lograr lamáxima eliminación de cápsides vacías y parciales con un rendimiento de más del 80 %”, MIFARINOX