Pharmaceutical Technology Ed. 191

26 Pharmaceutical Techno logy Edición Sudamérica 2024 - N º191 concluyó Khanal en su presentación. Mientras tanto, en una presentación diferente dada en ASGCT 2024 por Alex Meola, director asociado de Desarrollo de Procesos Descendentns de AAV en Oxford Biomedica, se demostró que la cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) se puede utilizar para separar las cápsides no desamidadas de las cápsides desamidadas 2 . Según Meola, la industria se ha centrado en cómo la desamidación de la proteína de la cápside de los residuos específicos de la proteína viral 1 (VP1), que incluye el dominio N57, está relacionada con una pérdida de potencia in vivo 3 . “La temperatura, el pH y el tiempo de almacenamiento se han identificado como factores clave que causan este fenóme- no”, dijo Meola en su presentación 2 . “En nuestra búsqueda en Oxford Biomedica, para tratar de resolver esto, tenemos un protocolo de detección de capacidad de unión estática que ejecutamos en el que observamos una variedad de residentes di- ferentes. En este caso, decidimos observar a los residentes tolerantes a la sal”, afirmó. Además del control del proceso para evitar la desamidación, el equipo deMeola planteó la hipótesis de que la extrusión de VP1 y la desamidación de N57 son fenómenos relacionados y, además, que este fenómeno conectado da como re- sultado la generación de cápsides vacías, parciales y completas 4 . El equipo también creía que la generación de estas cápsides mixtas compromete significativamente la capacidad del proceso AEX para eliminar las cápsides vacías y administrar terapias génicas AAV funcionales. Meola señaló que las técnicas de se- paración impulsadas por carga no han proporcionado la resolución tan necesa- ria para permitir la diferenciación entre especies de cápsides desamidadas y no desamidadas. Por lo tanto, su equipo uti- lizó enfoques novedosos que se pueden aplicar al proceso AEX para abordar este complejo desafío de eliminar tanto las cápsides vacías como las cápsides intactas desamidadas. En un enfoque, Meola y su equipo utili- zaron HIC para separar picos distintos con una resolución cercana a la línea base. Después de la separación, cada pico se aisló y se reprocesó individualmente con AEX. “Sorprendentemente, descubrimos que la HIC resolvió dos especies diferentes de cápsides de AAV con una resolución cercana a la línea base. Cada especie se reprocesó en AEX y se evaluaron todos los atributos de calidad del producto para los picos intermedios que se generaron. Descubrimos que las cápsides que eran más hidrófobas también tenían una carga más negativa”, explicó en su presentación. Los datos del análisis de cromatografía líquida-espectrometría de masas demos- traron además que las cápsidesmás hidró- fobas y con cargamás negativa exhibieron niveles significativos de desamidación N57 específica de VP1, que se ha relacionado con una pérdida de expresión génica, se- ñaló Meola. El estudio del equipo demostró así que la HIC puede ser un método útil para se- parar las cápsides no desamidadas de las cápsides desamidadas.